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利用超濾離心管進(jìn)行蛋白質(zhì)濃縮和純化的方法及步驟

  • 發(fā)布日期:2023-08-19      瀏覽次數(shù):1049
    •   超濾離心管是一種常用于蛋白質(zhì)濃縮和純化的工具。下面是利用離心管進(jìn)行蛋白質(zhì)濃縮和純化的一般方法和步驟:
       
        1、準(zhǔn)備工作:
       
        清洗離心管:使用去離子水或適當(dāng)?shù)那逑淳彌_液,清洗以去除可能存在的污染物。
       
        儲(chǔ)備試劑:準(zhǔn)備好用于濃縮和純化的緩沖液,包括溶解樣品的緩沖液、洗滌緩沖液和洗脫緩沖液。
       
        2、樣品制備:
       
        根據(jù)需要,將待濃縮和純化的蛋白質(zhì)樣品溶解在合適的緩沖液中,確保最終濃度適宜并且緩沖液成分與超濾離心管適配。
       
        如有必要,對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理,如去除顆粒物、混凝等。
       
        3、超濾濃縮:
       
        將樣品注入超濾離心管,并根據(jù)廠商提供的建議填充合適量的樣品。
       
        使用低速離心(通常低于1,000 × g)將樣品濃縮在管中。重復(fù)此步驟,直到達(dá)到所需的濃縮程度。

      超濾離心管

        4、洗滌:
       
        加入洗滌緩沖液,用洗滌緩沖液洗滌管中的濃縮蛋白質(zhì)。洗滌緩沖液的成分和pH應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行優(yōu)化。
       
        5、純化:
       
        通過離心去除洗滌緩沖液,并添加洗脫緩沖液至管中,以洗脫目標(biāo)蛋白質(zhì)。
       
        使用適當(dāng)?shù)碾x心速度和時(shí)間,將洗脫后的蛋白質(zhì)從管中收集。
       
        6、蛋白質(zhì)質(zhì)量評(píng)估:
       
        可使用各種方法,如SDS-PAGE、Western blot等對(duì)純化后的蛋白質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。
       
        根據(jù)需要,可以將純化后的蛋白質(zhì)進(jìn)一步處理、保存或進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
       
        請(qǐng)注意,具體步驟和條件可能因不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮托吞?hào)而有所不同。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn)、說明書或向廠商咨詢以獲取準(zhǔn)確的操作步驟和建議。
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